Thèses de Doctorat "Biotechnologie"

URI permanent de cette collection

https://dspace.univ-oran1.dz/handle/123456789/59

Parcourir par

Parcourir la collection Thèses de Doctorat "Biotechnologie" par Sujet "Activité protéolytique"

Voici les éléments 1 - 2 sur 2
  • Item
    Hydrolyse des caséines par des souches de bactéries Lactiques d'origine laitière : Fractionnement et Caractérisation des peptides générés
    (Université Oran1 Ahmed Ben Bella, 2019-06-18) BOUNOUALA Fatima Zohra
    Nous avons mis en évidence le caractère protéolytique de deux lactobacilles Lb. brevis CHTD27, Lb. plantarum BH14 et d'un lactocoque Lc. lactis LCL. Les trois souches ont montré l'aptitude à produire des protéases dans le milieu de croissance lorsque celui-ci est additionné de lait. Les deux lactobacilles se sont révélés plus protéolytiques que le lactocoque. Les protéases extracellulaires ont été concentrées par précipitation au sulfate d'ammonium (80%), puis dialysées avant de les utiliser pour hydrolyser les caséines de différentes sources (lait de brebis, lait de chamelle et lait de vache), comparativement à l'enzyme digestive la trypsine.L'activité enzymatique des protéases bactériennes et de la trypsine a été évaluée par différentes méthodes biochimiques. Nous avons trouvé que l'hydrolyse des caséines dans les conditions réalisées est maximale après 24 heures de réaction, les protéases issues des lactobacilles CHTD27 et BH14 sont plus actives sur les caséines (quelle que soit leur source) comparativement aux protéases issues du lactocoque LCL. Le DH exprimé en pourcentage révèle que l'étendue de l'hydrolyse est plus importante avec la trypsine qu'avec les protéases bactériennes. L'analyse des hydrolysats par HPLC-MS/MS a permis de révéler et d'identifier de nombreux peptides qui correspondent à des fragments dans les caséines ?, ?s1, ?s2 et ?. Les profils peptidiques des hydrolysats diffèrent en fonction de la source de caséine et de l'enzyme protéolytique utilisée pour l'hydrolyse. Parmi les peptides identifiés dans ce travail, plusieurs sont apparentés à des séquences décrites potentiellement bioactives: antihypertensive, antidiabétique, antioxydante, antimicrobienne, immunomodulatrice et anticancéreuce. L'évaluation in-vitro des activités biologiques a démontré que les hydrolysats obtenus contiennent des peptides inhibiteurs des enzymes ECA et DPP-IV, des peptides antioxydants et des peptides antibactériens.
  • Item
    Protéolyse chez lactobacillus purification et caractérisation de protéases et aminopeptidase
    (Université Oran1 Ahmed Ben Bella, 2010-11-08) Roudj Salima
    Nous avons étudié l'activité protéolytique chez les deux lactobacilles BH14 et CHTD27 isolés de lait de chamelle. Les deux bactéries ont montré l'aptitude à la protéolyse des caséines du lait ou des caséines en solution et celle de produire des protéases dans le milieu de croissance. Nous avons observé que les protéases liées à la paroi bactérienne ne sont pas libérées parautoprotéolyse mais qu'elles y sont ancrées par covalence. L'étude des protéases extracellulaires a montré que celles-ci sont des métallo-enzymes et leurs activités sont différemment sensibles aux ions. La spécificité de l'hydrolyse des caséines (α, β, k) dépend de la souche. Les protéases de la souche BH14 sont actives à pH acide (4,0-5,0) ainsi qu'à pH alcalin (8, 0). Nous avons montré que les profils peptidiques distincts. Aucun mutant protéolyse-déficient (Prt-) n'a pu être obtenu après mutagenèse aux rayons UV ou par curage d'ADN plasmidique, ce qui indique que les gènes impliqués doivent être portés par le chromosome chez BH14 et CHTD27. Les deux bactéries ont montré une activité leucyl-aminopeptidasique sur le substrat chromogène leucylparanitroanilide. L'enzyme extraite après traitement glycine/lysozyme et purification par chromatographie (Sephadex G100 et DEAE) et par électrophorèse SDS-PAGE a montré une structure dimérique. L'activité de l'enzymeleucyl-aminopeptidase de la bactérie CHTD27 est sensible à l'EDTA et elle est fortement inhibée par les ions Cu2+. Chez BH14, l'enzyme est sensible à l'EDTA et au PMSF ; par contre elle est augmentée par les ions Na+ et Co2+. Les deux bactéries ont montré une activité autolytique induite élevée. La cytométrie en flux, associée à la microscopie à fluorescence, a montré que plus de 50% des cellules de la souche BH14, cultivées en fermenteur jusqu'à la phase stationnaire de croissance, restent viables durant au moins 120 heures.