Identification des bactéries lactiques par l’utilisation des techniques moléculaires (profils protéiques et génétiques) applicables dans le domaine de la taxonomie.
Identification des bactéries lactiques par l’utilisation des techniques moléculaires (profils protéiques et génétiques) applicables dans le domaine de la taxonomie.
Fichiers
Date
2014-06-22
Auteurs
Ghazi Fatima
Nom de la revue
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Éditeur
Université Oran1 Ahmed Ben Bella
Résumé
Dans la première partie de cette thèse les travaux de recherches réalisés sur les bactéries lactiques, en Algérie, ont été exposés. L’identification, en particulier des souches à l’intérieur de l’espèce est indispensable à tous ces thèmes abordés. Les méthodes moléculaires telles que la SDS-PAGE, la RAPD-PCR et la PFGE sont d’usage pour le typage moléculaire des souches de bactéries lactiques. La SDS-PAGE peut ne pas distinguer les sous espèces très proches phylogénétiquement. La PFGE et RAPD-PCR sont d’usage dans l’identification intra-spécifique. La fiabilité de ces deux méthodes dans l’identification des souches de Streptococcus thermophilus a été traitée. Trois amorces (XD9, M13 et OPI-02 MOD) et deux enzymes de restrictions (SmaI, ApaI) ont été testés. La reproductibilité, la typabilité, le pouvoir discriminant et la congruence entre les deux méthodes ont été examinées. Afin d’optimiser la méthode RAPD-PCR différentes concentrations d’amorces, d’ADN et d’enzyme Taq DNA polymérase ont été testées. Le Ratio Amorce/ADN a été ajusté. La reproductibilité a été vérifiée en différents jours et cinq mois plus tard. Il en a résulté que la meilleure reproductibilité a été obtenue avec l’amorce OPI-02 MOD et la pire avec l’amorce XD9 qui a été donc exclue de la suite de l’étude. Les résultats ont été exprimés en construisant des dendrogrammes par la méthode UPGMA. La valeur d’indice de diversité (DI) la plus élevée a été avec l’enzyme SmaI et la plus faible avec l’amorce M13. La combinaison numérique des résultats des deux amorces et des deux enzymes de restrictions a produit des valeurs d’indice de diversité et de congruence supérieure. Le résultat de la PFGE (SmaI, ApaI) a pu prédire les types de la RAPD (OPI-02 MOD, M13) avec une valeur d’indice de Wallace de 0.805. D’autre part, l’application des critères de Tenover et collaborateurs a montré une faible corrélation entre les deux méthodes. L’usage de la technique Multidimensional scaling a confirmé le résultat de la méthode UPGMA.
Description
Mots-clés
Reproductibilité,St Thermophilus,RAPD-PCR,
Optimisation,PFGE,MDS,UPGMA,Congruence,pouvoir discriminant,Identification intra-spécifique